Phim Tom and Jerry: Cowboy Up kể về cuộc phiêu lưu của Tom và Jerry cùng nhau giúp đỡ một cô gái chăn bò và anh trai của cô ấy cứu ngôi nhà của họ khỏi một tên cướp đất tham lam. Để thực hiện nhiệm vụ này, ba đứa cháu trai sớm của Jerry đã sẵn sàng hành động, trong khi Tom thành lập một đàn chó để hỗ trợ. Tuy nhiên, liệu nhóm này có thể đánh bại được kẻ gian dối quyết tâm đánh lừa tên cướp hay không? Dù cho có khó khăn xảy ra, Tom và Jerry luôn sẵn sàng chiến đấu trong cuộc phiêu lưu này.
