Phim Tân Tiểu Ngũ Nghĩa kể về cuộc chiến giành ngôi vị hoàng đế giữa các phe phái trong thế giới võ lâm. Vua Tương Dương âm mưu gây loạn, khiến cho năm con chuột phải cùng nhau hợp tác để chống lại ông. Trong đó, Bai Yutang hy sinh để bảo vệ danh hiệu liên minh, con trai của ông - Bai Yunsheng quyết tâm trả thù và tái lập danh tiếng gia tộc. Nữ hoàng ba chuột Xu Liang, Han Tianjin và Lu Zhen cũng không chịu thua cuộc, họ hợp sức với con trai Bắc Chivalrous Ai Hu để đánh bại kẻ thù. Sau nhiều khó khăn và gian nan, cuối cùng họ đã chiến thắng và đoạt được ngôi vị hoàng đế - "Tiểu Ngũ Chính". Tuy nhiên, để cạnh tranh quyền lực và danh hiệu, Xiao Wuyi đã tách ra khỏi nhóm và gây ra nhiều rắc rối. Năm người bạn bị chia cắt, Yun Sheng và Ai Hu bị đóng khung vì âm mưu nổi loạn của kẻ xấu. Từ Thiên Long muốn chiếm đoạt ngai vàng và hạ độc Xueer - chị gái của Xiao Wuyi, khiến cho anh phải ra sức giải cứu hai người. Phim mang đậm dấn tính võ thuật cổ trang, với những màn võ công mãn nhãn của các diễn viên hàng đầu như Lý Văn Bưu, Vĩ Liệt hay Phật Liệt Lý Nguyên Khoa. Câu chuyện xoay quanh lòng dũng cảm, tình bạn và trách nhiệm trong cuộc sống võ lâm khắc nghiệt này sẽ chắc chắn làm say lòng biết bao khán giả yêu thích phim võ thuật.